本技術(shù)涉及特異性結(jié)合腫瘤壞死因子受體2(tnfr2)的抗原結(jié)合蛋白(例如抗體，諸如單結(jié)構(gòu)域抗體)、其制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

1、調(diào)節(jié)t細(xì)胞(treg)是t細(xì)胞亞群，其在外周自身耐受和預(yù)防自身免疫疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。由于其強(qiáng)大的免疫抑制功能，treg可以成為治療自身免疫疾病的靶點(diǎn)。當(dāng)前尋求增加或調(diào)節(jié)自身免疫疾病患者中treg的策略是基于自體移植前的treg離體擴(kuò)增。然而，當(dāng)前策略的主要限制是它們無法穩(wěn)定treg表型以確保持久的免疫調(diào)節(jié)。

2、腫瘤壞死因子受體2(tnfr2)信號(hào)傳導(dǎo)已被證明可誘導(dǎo)treg中的增殖、持續(xù)抑制功能和foxp3啟動(dòng)子去甲基化(tseng等人，2019)。tnfr2信號(hào)傳導(dǎo)也誘導(dǎo)ezh2的表達(dá)(urbano等人，2018)，ezh2是組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，其參與抑制效應(yīng)轉(zhuǎn)錄組程序和穩(wěn)定treg表型(dupage等人，2015)。由于其在treg生物學(xué)和foxp3啟動(dòng)子去甲基化中的作用，tnfr2信號(hào)傳導(dǎo)可用于誘導(dǎo)穩(wěn)定的免疫抑制表型和增強(qiáng)其有益于自身免疫疾病的功能。因此，本領(lǐng)域需要研發(fā)可有效地活化tnfr2信號(hào)傳導(dǎo)的治療性分子。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、如上文技術(shù)背景部分中所提及的，本領(lǐng)域存在研發(fā)可有效活化tnfr2信號(hào)傳導(dǎo)的治療性分子的未滿足的需求。本技術(shù)提供了解決該需求及其他相關(guān)需求的組合物和方法。

2、在一個(gè)方面，本技術(shù)內(nèi)容提供一種特異性結(jié)合腫瘤壞死因子受體2(tnfr2)的抗原結(jié)合蛋白，其包含互補(bǔ)決定區(qū)3(cdr3)，所述互補(bǔ)決定區(qū)3(cdr3)包含選自以下各項(xiàng)的氨基酸序列：

3、a).(y/f)yq(s/a)ls(t/s)(p/a)n(y/f)gq(v/t)f(seq?id?no:60)；

4、b).aadsdl(s/r)tv(v/t)vgphdy(seq?id?no:61)；

5、c).akdag(s/g)wg(t/r)gpfg(y/f)(e/d)ydy(seq?id?no:62)；

6、d).aa(t/a)psgkay(t/s)y(seq?id?no:63)；

7、e).atpgpy(t/s/m)ycapygsswsrgydy(seq?id?no:64)；

8、f).arv(r/g)g(t/s/a)py(e/d)y(n/g)y(seq?id?no:65)；

9、g).(t/a/v)a(s/a)ptgraf(t/n/a)y(seq?id?no:66)；

10、h).agsafdf(seq?id?no:42)；

11、i).s(v/m)(v/l)grdm(m/v)ty(seq?id?no:67)；

12、j).avgdfegelvlkgdy(seq?id?no:4063)；

13、k).aad(l/v)g(f/v/y)ly(a/t/v)dyv(p/r)lh(m/t)hhfgs(seq?id?no:4517)；

14、l).a(a/g)(t/a)(p/l)(s/t)gkay(t/s)y(seq?id?no:4771)。

15、在一些實(shí)施方案中，cdr3包含選自seq?id?no:3、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、4063、4067、4071、4524、4530和4727至4730的氨基酸序列。

16、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白進(jìn)一步包含cdr1，所述cdr1包含選自以下各項(xiàng)的氨基酸序列：

17、a).gsi(v/f)(r/s)(t/a)(n/d)(s/g/a)(seq?id?no:68)；

18、b).gft(f/l)dd(i/y)a(seq?id?no:69)；

19、c).gftfs(s/r/g)ya(seq?id?no:70)；

20、d).grtfsdyg(seq?id?no:16)；

21、e).g(l/f)tldyya(seq?id?no:71)；

22、f).gf(t/n)fsmys(seq?id?no:72)；

23、g).grtf(g/r/s)(n/s)(y/l)(t/f)(seq?id?no:73)；

24、h).gaslsrna(seq?id?no:40)；

25、i).gs(i/t)frfpp(seq?id?no:74)；

26、j).gftlddya(seq?id?no:4061)；和

27、k).g(f/v)(s/t)ld(d/y)(h/y)t(seq?id?no:4519)。

28、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含cdr1，所述cdr1包含選自seq?id?no:1、5、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、4061、4065、4069、4520和4719至4722的氨基酸序列。

29、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含cdr2，所述cdr2包含選自以下各項(xiàng)的氨基酸序列：

30、a).irsdgf(t/i)(seq?id?no:75)；

31、b).i(y/f)sy(s/g)(s/p)nt(seq?id?no:76)；

32、c).i(y/s)(s/d)dgs(e/d)t(seq?id?no:77)；

33、d).inwsn(g/a)rt(seq?id?no:4699)；

34、e).i(s/n)(v/t)(s/g)dgst(seq?id?no:78)；

35、f).idt(r/g)gst(seq?id?no:79)；

36、g).ir(w/r/y)(t/p)g(g/l)(s/i)t(seq?id?no:80)；

37、h).iyddget(seq?id?no:41)；

38、i).ltsggst(seq?id?no:45)；

39、j).ifsyssnt(seq?id?no:4062)；和

40、k).i(n/s)sndg(s/t)(t/v)(seq?id?no:4518)。

41、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含cdr2，所述cdr2包含選自seq?id?no:2、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、4062、4066、4070、4527和4723至4726的氨基酸序列。

42、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

43、i)包含seq?id?no:68的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:75的氨基酸序列的cdr2和包含seq?id?no:60的氨基酸序列的cdr3；

44、ii)包含seq?id?no:69的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:76的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:61的氨基酸序列的cdr3；

45、iii)包含seq?id?no:70的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:77的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:62的氨基酸序列的cdr3；

46、iv)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4699的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:63的氨基酸序列的cdr3；

47、v)包含seq?id?no:71的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:78的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:64的氨基酸序列的cdr3；

48、vi)包含seq?id?no:72的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:79的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:65的氨基酸序列的cdr3；

49、vii)包含seq?id?no:73的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:80的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:66的氨基酸序列的cdr3；

50、viii)包含seq?id?no:40的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:41的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:42的氨基酸序列的cdr3；或

51、ix)包含seq?id?no:74的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:45的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:67的氨基酸序列的cdr3；

52、x)包含seq?id?no:4061的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4062的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4063的氨基酸序列的cdr3；

53、xi)包含seq?id?no:4519的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4518的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4517的氨基酸序列的cdr3；或

54、xii)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4699的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4771的氨基酸序列的cdr3。

55、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

56、a)包含seq?id?no:69的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:76的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:61的氨基酸序列的cdr3；

57、b)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4699的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:63的氨基酸序列的cdr3；

58、c)包含seq?id?no:73的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:80的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:66的氨基酸序列的cdr3；或

59、d)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4699的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4771的氨基酸序列的cdr3。

60、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

61、i)具有g(shù)si(v/f)(r/s)(a/t)(n/d)(g/a)(seq?id?no:4700)的氨基酸序列的cdr1、包含irsdgft(seq?id?no:2)的氨基酸序列的cdr2和包含yyq(s/a)lsspnygq(v/t)f(seq?idno:4701)的氨基酸序列的cdr3；

62、ii)具有g(shù)ftfddia(seq?id?no:8)的氨基酸序列的cdr1、包含iysygpnt(seq?idno:9)的氨基酸序列的cdr2和包含aadsdlstvv(v/t)gphdy(seq?id?no:4702)的氨基酸序列的cdr3；

63、iii)具有g(shù)ftfsrya(seq?id?no:12)的氨基酸序列的cdr1、包含isddgsdt(seq?idno:13)的氨基酸序列的cdr2和包含akdagswgtgpfgyeydy(seq?id?no:14)的氨基酸序列的cdr3；

64、iv)具有g(shù)rtfsdyg(seq?id?no:16)的氨基酸序列的cdr1、包含inwsn(g/a)rt(seqid?no:4699)的氨基酸序列的cdr2和包含aa(t/a)psgkaysy(seq?id?no:4703)的氨基酸序列的cdr3；

65、v)具有g(shù)ltldyya(seq?id?no:20)的氨基酸序列的cdr1、包含istsdgst(seq?idno:21)的氨基酸序列的cdr2和包含atpgpytycapygsswsrgydy(seq?id?no:22)的氨基酸序列的cdr3；

66、vi)具有g(shù)f(t/n)fsmys(seq?id?no:72)的氨基酸序列的cdr1、包含idt(r/g)gst(seq?id?no:79)的氨基酸序列的cdr2和包含arv(g/r)g(t/a)pyey(n/g)y(seq?id?no:4704)的氨基酸序列的cdr3；

67、vii)具有g(shù)rtf(g/s)s(y/l)(t/f)(seq?id?no:4705)的氨基酸序列的cdr1、包含ir(w/r/y)(t/p)g(g/l)(s/i)t(seq?id?no:80)的氨基酸序列的cdr2和包含(a/v)a(a/s)ptgraf(t/n)y(seq?id?no:4707)的氨基酸序列的cdr3；

68、viii)具有g(shù)aslsrna(seq?id?no:40)的氨基酸序列的cdr1、包含iyddget(seq?idno:41)的氨基酸序列的cdr2和包含agsafdf(seq?id?no:42)的氨基酸序列的cdr3；

69、ix)具有g(shù)s(t/i)frfpp(seq?id?no:4708)的氨基酸序列的cdr1、包含ltsggst(seqid?no:45)的氨基酸序列的cdr2和包含svlgrdm(m/v)ty(seq?id?no:4706)的氨基酸序列的cdr3；

70、x)具有g(shù)ftlddya(seq?id?no:4061)的氨基酸序列的cdr1、包含ifsyssnt(seq?idno:4062)的氨基酸序列的cdr2和包含avgdfegelvlkgdy(seq?id?no:4063)的氨基酸序列的cdr3；

71、xi)具有g(shù)ftldyyyt(seq?id?no:4065)的氨基酸序列的cdr1、包含issndgsv(seqid?no:4066)的氨基酸序列的cdr2和包含aadlgylyvdyvrlhthhfgs(seq?id?no:4067)的氨基酸序列的cdr3；或

72、xii)具有g(shù)rtfsdyg(seq?id?no:16)的氨基酸序列的cdr1、包含inwsn(g/a)rt(seqid?no:4699)的氨基酸序列的cdr2和包含a(a/g)(t/a)(p/l)(s/t)gkay(t/s)y(seq?id?no:4771)的氨基酸序列的cdr3。

73、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

74、a)具有g(shù)ftfddia(seq?id?no:8)的氨基酸序列的cdr1、包含iysygpnt(seq?id?no:9)的氨基酸序列的cdr2和包含aadsdlstvv(v/t)gphdy(seq?id?no:4702)的氨基酸序列的cdr3；

75、b)具有g(shù)rtfsdyg(seq?id?no:16)的氨基酸序列的cdr1、包含inwsn(g/a)rt(seqid?no:4699)的氨基酸序列的cdr2和包含aa(t/a)psgkaysy(seq?id?no:4703)的氨基酸序列的cdr3；

76、c)具有g(shù)rtf(g/s)s(y/l)(t/f)(seq?id?no:4705)的氨基酸序列的cdr1、包含ir(w/r/y)(t/p)g(g/l)(s/i)t(seq?id?no:80)的氨基酸序列的cdr2和包含(a/v)a(a/s)ptgraf(t/n)y(seq?id?no:4707)的氨基酸序列的cdr3；或

77、d).具有g(shù)rtfsdyg(seq?id?no:16)的氨基酸序列的cdr1、包含inwsn(g/a)rt(seqid?no:4699)的氨基酸序列的cdr2和包含a(a/g)(t/a)(p/l)(s/t)gkay(t/s)y(seq?id?no:4771)的氨基酸序列的cdr3。

78、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

79、i)包含seq?id?no:1的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:2的氨基酸序列的cdr2和包含seq?id?no:3的氨基酸序列的cdr3；

80、ii)包含seq?id?no:5的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:2的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:6的氨基酸序列的cdr3；

81、iii)包含seq?id?no:8的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:9的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:10的氨基酸序列的cdr3；

82、iv)包含seq?id?no:12的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:13的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:14的氨基酸序列的cdr3；

83、v)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:17的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:18的氨基酸序列的cdr3；

84、vi)包含seq?id?no:20的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:21的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:22的氨基酸序列的cdr3；

85、vii)包含seq?id?no:24的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:25的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:26的氨基酸序列的cdr3；

86、viii)包含seq?id?no:28的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:29的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:30的氨基酸序列的cdr3；

87、ix)包含seq?id?no:32的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:33的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:34的氨基酸序列的cdr3；

88、x)包含seq?id?no:36的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:37的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:38的氨基酸序列的cdr3；

89、xi)包含seq?id?no:40的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:41的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:42的氨基酸序列的cdr3；

90、xii)包含seq?id?no:44的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:45的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:46的氨基酸序列的cdr3；

91、xiii)包含seq?id?no:4061的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4062的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4063的氨基酸序列的cdr3；

92、xiv)包含seq?id?no:4065的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4066的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4067的氨基酸序列的cdr3；

93、xv)包含seq?id?no:4069的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4070的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4071的氨基酸序列的cdr3；

94、xvi)包含seq?id?no:4520的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:45的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:46的氨基酸序列的cdr3；

95、xvii)包含seq?id?no:8的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:9的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4524的氨基酸序列的cdr3；

96、xviii)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4527的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:18的氨基酸序列的cdr3；

97、xix)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4527的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4530的氨基酸序列的cdr3；

98、xx)包含seq?id?no:4719的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4723的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4727的氨基酸序列的cdr3；

99、xxi)包含seq?id?no:4720的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4724的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4728的氨基酸序列的cdr3；

100、xxii)包含seq?id?no:4721的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4725的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4729的氨基酸序列的cdr3；或

101、xxiii)包含seq?id?no:4722的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4726的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4730的氨基酸序列的cdr3。

102、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含：

103、a)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:17的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:18的氨基酸序列的cdr3；

104、b)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4527的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:18的氨基酸序列的cdr3；

105、c)包含seq?id?no:16的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4527的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4530的氨基酸序列的cdr3；

106、d)包含seq?id?no:8的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:9的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:10的氨基酸序列的cdr3；

107、e)包含seq?id?no:8的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:9的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4524的氨基酸序列的cdr3；

108、f)包含seq?id?no:4069的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4070的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4071的氨基酸序列的cdr3；

109、g)包含seq?id?no:4719的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4723的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4727的氨基酸序列的cdr3；

110、h)包含seq?id?no:4720的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4724的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4728的氨基酸序列的cdr3；

111、i)包含seq?id?no:4721的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4725的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4729的氨基酸序列的cdr3；或

112、j)包含seq?id?no:4722的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:4726的氨基酸序列的cdr2、包含seq?id?no:4730的氨基酸序列的cdr3。

113、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白為單結(jié)構(gòu)域抗體。在一些實(shí)施方案中，單結(jié)構(gòu)域抗體為vhh、vnar或經(jīng)工程改造的vh結(jié)構(gòu)域。

114、在一些實(shí)施方案中，vhh為駱駝vhh。在一些實(shí)施方案中，vhh包含選自seq?id?no:4、7、11、15、19、23、27、31、35、39、43、47、4064、4068、4072、4521、93至640、4079至4125、2805至3363、4359至4420和4605至4628中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，vhh包含選自seq?id?no:4、7、11、15、19、23、27、31、35、39、43、47、4064、4068、4072和4521中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。

115、在一些實(shí)施方案中，vhh為人源化vhh。在一些實(shí)施方案中，人源化vhh包含選自seqid?no:81至92、4076至4078、4523、4526、4529、4532、4731至4734、641至1127和4126至4172中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，人源化vhh包含選自seq?id?no:81至92、4076至4078、4523、4526、4529、4731至4734和4532中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。

116、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白在與tnfr2結(jié)合時(shí)具有激動(dòng)劑作用。

117、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合于人類tnfr2。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以小于約3×10-7m的kd結(jié)合于人類tnfr2。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以約1×10-10至5×10-8m的kd結(jié)合于人類tnfr2。

118、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合于食蟹猴tnfr2。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以小于約3×10-7m的kd結(jié)合于食蟹猴tnfr2。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以約1×10-9至2×10-7m的kd結(jié)合于食蟹猴tnfr2。

119、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合與抗體克隆mr2-1相同的一個(gè)或多個(gè)表位。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白不結(jié)合與抗體克隆mr2-1相同的一個(gè)或多個(gè)表位。

120、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白增加選自nf-kb通路中的蛋白質(zhì)、foxp3、helios、ezh2、hla-dr、icam-1、ox-40、icos和ccr8的一種或多種蛋白質(zhì)的表達(dá)。

121、在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含一種或多種修飾，所述一種或多種修飾減少所述抗原結(jié)合蛋白與人類血液或血清中發(fā)現(xiàn)的預(yù)先存在的抗體的結(jié)合。

122、在另一方面，本文提供一種特異性結(jié)合腫瘤壞死因子受體2(tnfr2)的融合蛋白，其包含一種或多種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。

123、在一些實(shí)施方案中，融合蛋白包含兩種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。在一些實(shí)施方案中，融合蛋白包含三種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。在一些實(shí)施方案中，融合蛋白包含四種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。在一些實(shí)施方案中，融合蛋白包含五種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。在一些實(shí)施方案中，融合蛋白包含六種本文所描述的抗原結(jié)合蛋白。

124、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，一種或多種抗原結(jié)合蛋白可結(jié)合于tnfr2上的相同表位。在其他實(shí)施方案中，一種或多種抗原結(jié)合蛋白可結(jié)合于tnfr2上的不同表位。

125、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，一種或多種抗原結(jié)合蛋白為一種或多種單結(jié)構(gòu)域抗體。在一些實(shí)施方案中，所述一種或多種單結(jié)構(gòu)域抗體為一種或多種vhh。

126、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，融合蛋白進(jìn)一步包含免疫球蛋白fc區(qū)。在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為人類免疫球蛋白的fc區(qū)。在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為人類igg1、igg2、igg3或igg4的fc區(qū)，或其變體。

127、在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為人類igg1的fc區(qū)，或其變體。在一些實(shí)施方案中，人類igg1的fc區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)選自根據(jù)eu編號(hào)的l234a、l235a、g237a、d265a、n297a和/或p329a的突變。在一些實(shí)施方案中，人類igg1的fc區(qū)包含選自以下各項(xiàng)的一組突變：

128、1).l234a和l235a；

129、2).l234a、l235a和p329a；

130、3).d265a、n297a和p329a；和

131、4).l234a、l235a和g237a。

132、在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為包含l234a、l235a和p329a的人類igg1的fc區(qū)。

133、在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為人類igg4的fc區(qū)，或其變體。在一些實(shí)施方案中，人類igg4的fc區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)選自根據(jù)eu編號(hào)的s228p、l235e、l235a和/或f234a的突變。在一些實(shí)施方案中，人類igg4的fc區(qū)包含選自以下各項(xiàng)的一組突變：

134、1).s228p和l235e；

135、2).s228p和l235a；

136、3).s228p、f234a和l235e；和

137、4).s228p、f234a和l235a。

138、在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白fc區(qū)為包含s228p和l235e的人類igg4的fc區(qū)。

139、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，融合蛋白進(jìn)一步包含細(xì)胞因子。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為il-2或其變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為包含n88d突變的il-2變體。

140、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，融合蛋白進(jìn)一步包含結(jié)合于血清白蛋白的部分。

141、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，所述融合蛋白包含seq?id?no:3933至3964、4483至4513、4686至4696、4709至4716和4735至4770中任一項(xiàng)的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。

142、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，所述融合蛋白包含seq?id?no:4483的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。

143、在本文所描述的融合蛋白的一些實(shí)施方案中，所述融合蛋白包含seq?id?no:4489的氨基酸序列或與其具有至少75％同一性的序列。

144、在另一方面，本文提供一種偶聯(lián)物，其包含本文所描述的抗原結(jié)合蛋白或本文所描述的融合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白或融合蛋白與第二部分結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，第二部分選自可檢測(cè)的標(biāo)記物、藥物、毒素、放射性核素、酶、免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、細(xì)胞毒性劑、化學(xué)治療劑、診斷劑或其組合。

145、在本文所描述的偶聯(lián)物的一些實(shí)施方案中，其中所述第二部分為細(xì)胞因子。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為il-2或其變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞因子為包含n88d突變的il-2變體。

146、在另一方面，本文提供一種編碼本文所描述的抗原結(jié)合蛋白或本文所描述的融合蛋白的多聚核苷酸分子。在一些實(shí)施方案中，多聚核苷酸分子包含seq?id?no:48至59、4073至4075、4522、4525、4528、4531、3364至3922、4421至4482和4629至4652中任一項(xiàng)的核苷酸序列或與其具有至少70％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，多聚核苷酸分子包含seq?idno:48至59、4073至4075、4522、4525、4528和4531中任一項(xiàng)的核苷酸序列或與其具有至少70％同一性的序列。

147、在另一方面，本文提供一種重組載體，其包含本文所描述的多聚核苷酸分子。

148、在另一方面，本文提供一種宿主細(xì)胞，其包含本文所描述的多聚核苷酸分子或本文所描述的表達(dá)載體。

149、在另一方面，本文提供一種試劑盒，其包含本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白、偶聯(lián)物、多聚核苷酸分子或重組載體，以及任選地，它們的說明書和/或包裝。

150、在另一方面，本文提供一種藥物組合物，其包含本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白、偶聯(lián)物、多聚核苷酸分子或重組載體，和藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體和/或賦形劑。

151、在另一方面，本文提供一種用于制備特異性結(jié)合腫瘤壞死因子受體2(tnfr2)的抗原結(jié)合蛋白或融合蛋白的方法，其包括以下步驟：

152、(a)在培養(yǎng)基中在適合于表達(dá)抗原結(jié)合蛋白或融合蛋白的條件下培養(yǎng)本文所描述的宿主細(xì)胞，和

153、(b)從所述宿主細(xì)胞和/或培養(yǎng)基分離抗原結(jié)合蛋白或融合蛋白。

154、在另一方面，本文提供一種促進(jìn)調(diào)節(jié)t細(xì)胞(treg)群體的增殖、活化和/或增強(qiáng)抑制功能和/或穩(wěn)定免疫抑制表型的方法，其包括使調(diào)節(jié)t細(xì)胞群體與本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物接觸。在一些實(shí)施方案中，所述接觸在體外進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所述接觸在體內(nèi)進(jìn)行。在所述方法在體內(nèi)進(jìn)行的一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括向有需要的受試者施用抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物。

155、在另一方面，本文提供一種治療或預(yù)防有需要的受試者的疾病或病癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物。在一些實(shí)施方案中，所述疾病或病癥為免疫學(xué)疾病、炎癥性疾病、癌癥、心血管疾病、或不孕和妊娠相關(guān)疾病。

156、在一些實(shí)施方案中，免疫學(xué)疾病選自自身免疫疾病、神經(jīng)系統(tǒng)病況、過敏、哮喘、黃斑變性、肌肉萎縮癥、與流產(chǎn)相關(guān)的疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、骨質(zhì)流失、肌肉骨骼疾病、肥胖癥、移植物抗宿主病和同種異體移植物排斥。

157、在一些實(shí)施方案中，自身免疫疾病選自狼瘡、斑禿、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫阿狄森病(addison's?disease)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫肝炎、白塞病(behcet's?disease)、大皰性類天皰瘡、心肌病、乳糜瀉(celiac?sprue)-皮膚炎、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征(cfids)、慢性炎癥性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病、查格-施特勞斯綜合征(churg-strauss?syndrome)、瘢痕性類天皰瘡、crest綜合征、冷凝集素病、克羅恩病(crohn's?disease)、原發(fā)性混合性冷球蛋白血癥、纖維肌痛-纖維肌炎、goodpastures病、格雷夫氏病(graves'disease)、吉蘭-巴雷病(guillain-barré)、橋本甲狀腺炎、甲狀腺功能減退、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、iga腎病、幼年型關(guān)節(jié)炎、扁平苔蘚、硬化性苔蘚(lichen?sclerosis)、igg4相關(guān)疾病、梅尼爾氏病(meniere's?disease)、混合結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病、尋常型天皰瘡或相關(guān)起泡性皮膚病、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多軟骨炎、多腺性綜合征、風(fēng)濕性多發(fā)性肌痛、多發(fā)性肌炎和皮肌炎、卵巢早衰、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、原發(fā)性卵巢功能不全、雷諾氏現(xiàn)象(raynaud'sphenomenon)、萊特爾綜合征(reiter'ssyndrome)、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、斯耶格倫綜合征(syndrome)、脊柱關(guān)節(jié)炎、僵人綜合征、i型糖尿病、高安氏動(dòng)脈炎(takayasu?arteritis)、顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病(wegener's?granulomatosis)(肉芽腫性多血管炎)或其他免疫性血管炎。

158、在一些實(shí)施方案中，狼瘡為全身性紅斑狼瘡(sle)、皮膚狼瘡、狼瘡性腎炎、新生兒狼瘡或藥物誘導(dǎo)的狼瘡。在一些實(shí)施方案中，皮膚狼瘡為急性皮膚狼瘡、慢性皮膚紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡(dle)或亞急性皮膚紅斑狼瘡。

159、在一些實(shí)施方案中，自身免疫疾病為異位性皮炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡或關(guān)節(jié)炎。

160、在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)系統(tǒng)病況選自腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、脊髓損傷、精神分裂癥、癲癇、肌肉萎縮性側(cè)索硬化(als)、阿爾茲海默病、亨廷頓病、帕金森病和中風(fēng)。

161、在一些實(shí)施方案中，過敏選自食物過敏、季節(jié)性過敏、寵物過敏、蕁麻疹、枯草熱、過敏性結(jié)膜炎、毒藤過敏、橡樹過敏、霉菌過敏、藥物過敏、灰塵過敏、化妝品過敏和化學(xué)品過敏。

162、在一些實(shí)施方案中，同種異體移植物排斥選自皮膚移植物排斥、骨移植物排斥、血管組織移植物排斥、韌帶移植物排斥和器官移植物排斥。

163、在一些實(shí)施方案中，韌帶移植物排斥選自環(huán)甲韌帶移植物排斥、尾十字韌帶移植物排斥、牙周韌帶移植物排斥、晶狀體懸韌帶移植物排斥、橈腕掌側(cè)韌帶移植物排斥、橈腕背側(cè)韌帶移植物排斥、尺側(cè)副韌帶移植物排斥、橈側(cè)副韌帶移植物排斥、乳房懸韌帶移植物排斥、骶髂前韌帶移植物排斥、骶髂后韌帶移植物排斥、骶結(jié)節(jié)韌帶移植物排斥、骶棘韌帶移植物排斥、恥骨下韌帶移植物排斥、恥骨上韌帶移植物排斥、前十字韌帶移植物排斥、外側(cè)副韌帶移植物排斥、后十字韌帶移植物排斥、內(nèi)側(cè)副韌帶移植物排斥、顱十字韌帶移植物排斥和髕韌帶移植物排斥。

164、在一些實(shí)施方案中，器官移植物排斥選自心臟移植物排斥、肺移植物排斥、腎移植物排斥、肝移植物排斥、胰臟移植物排斥、腸移植物排斥和胸腺移植物排斥。

165、在一些實(shí)施方案中，移植物抗宿主病是由骨髓移植物或選自以下各項(xiàng)的一種或多種血細(xì)胞引起：b細(xì)胞、t細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、共同骨髓祖細(xì)胞、共同淋巴祖細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、造血干細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、巨核細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞。

166、在一些實(shí)施方案中，炎癥性疾病為急性炎癥或慢性炎癥。

167、在一些實(shí)施方案中，炎癥性疾病選自骨關(guān)節(jié)炎、異位性皮炎、子宮內(nèi)膜異位、多囊卵巢綜合征、炎癥性腸病、纖維化型肺疾病和心臟炎癥。

168、在一些實(shí)施方案中，所述癌癥選自腺樣囊性癌、腎上腺腫瘤、淀粉樣變性、肛門癌、闌尾癌、星形細(xì)胞瘤、共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、貝克威斯綜合征(beckwith-wiedemannsyndrome)、膽管癌(bileduct?cancer)(膽管細(xì)胞癌(cholangiocarcinoma))、birt-hogg-dubé綜合征、膀胱癌、骨癌(骨肉瘤)、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦瘤、乳腺癌、炎癥性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、男性乳腺癌、卡尼復(fù)合征(carney?complex)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤(腦瘤和脊髓瘤)、宮頸癌、兒童癌癥、結(jié)腸直腸癌、考登綜合征(cowden?syndrome)、顱咽管瘤、硬纖維瘤、嬰兒結(jié)締組織增生性神經(jīng)節(jié)膠質(zhì)瘤、兒童腫瘤、室管膜瘤、食管癌、尤因肉瘤(ewing?sarcoma)、眼癌、眼瞼癌、家族性多發(fā)性腺癌、家族性gist、家族性惡性黑色素瘤、家族性胰臟癌、膽囊癌、胃腸道間質(zhì)瘤(gist)、生殖細(xì)胞腫瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、頭頸癌、遺傳性乳腺癌和卵巢癌、遺傳性彌漫性胃癌、遺傳性平滑肌瘤病和腎細(xì)胞癌、遺傳性混合性息肉病綜合征、遺傳性胰臟炎、遺傳性乳頭狀腎癌、hiv/aids相關(guān)癌癥、幼年性息肉綜合征、腎癌、淚腺瘤、喉癌和下咽癌、急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、b細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病和毛細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、慢性t細(xì)胞淋巴細(xì)胞白血病、嗜酸性粒細(xì)胞性白血病、里-費(fèi)綜合征(li-fraumeni?syndrome)、肝癌、肺癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、霍奇金淋巴瘤(hodgkin?lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤、林奇綜合征(lynch?syndrome)、肥大細(xì)胞增多癥、成髓細(xì)胞瘤(medulloblastoma)、黑色素瘤、腦膜瘤、間皮瘤、1型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤、2型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤、多發(fā)性骨髓瘤、mutyh(或myh)相關(guān)息肉病、骨髓增生異常綜合征(mds)、鼻腔鼻竇癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胃腸道神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、肺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、胰臟神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、1型神經(jīng)纖維瘤、2型神經(jīng)纖維瘤、痣樣基底細(xì)胞瘤綜合征、口腔口咽癌、骨肉瘤、卵巢輸卵管和腹膜癌、胰臟癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、波伊茨-耶格綜合征(peutz-jeghers?syndrome)、嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤、垂體腺瘤、胸膜肺母細(xì)胞瘤、前列腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、卡波西肉瘤(kaposisarcoma)、軟組織肉瘤、皮膚癌(非黑色素瘤)、小腸癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、結(jié)節(jié)性硬化癥、子宮癌、陰道癌、希-林綜合征(von?hippel-lindausyndrome)、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥(waldenstrom?macroglobulinemia)(淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤)、維爾納綜合征(werner?syndrome)、腎母細(xì)胞瘤(wilms?tumor)或著色性干皮病。

169、在一些實(shí)施方案中，心血管疾病選自動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭、射血分?jǐn)?shù)減小型左心衰竭、射血分?jǐn)?shù)正常型左心衰竭、右心室衰竭、充血性心力衰竭、限制型心肌病、擴(kuò)張型心肌病、肥大性心肌病、缺血性心肌病、特發(fā)性心肌病和高血壓。

170、在一些實(shí)施方案中，不孕和妊娠相關(guān)疾病選自復(fù)發(fā)性妊娠流產(chǎn)、先兆子癇、未足月產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限或子宮內(nèi)生長(zhǎng)受限。

171、在另一方面，本文提供一種再生包含一種或多種tnfr2+細(xì)胞的組織或器官的方法，所述方法包括使所述組織或器官與有效量的本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物接觸。在一些實(shí)施方案中，所述組織或器官選自胰臟、唾液腺、垂體腺、腎臟、心臟、肺、造血系統(tǒng)、腦神經(jīng)、心臟、主動(dòng)脈、嗅腺、耳、神經(jīng)、眼、胸腺、舌、骨骼、肝臟、小腸、大腸、胃腸道、肺、腦、皮膚、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脊髓、乳房、胚胎結(jié)構(gòu)、胚胎和睪丸組織。在一些實(shí)施方案中，所述接觸在體外進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所述接觸在體內(nèi)進(jìn)行。在所述方法在體內(nèi)進(jìn)行的一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括向有需要的受試者施用抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物。

172、在上述方法的各種實(shí)施方案中，受試者為哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物為人類。

173、在另一方面，本文提供一種在有需要的受試者中誘導(dǎo)對(duì)外來物的耐受性和/或預(yù)防或減少對(duì)外來物的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向所述受試者施用本文所描述的抗原結(jié)合蛋白、融合蛋白或偶聯(lián)物。

174、在一些實(shí)施方案中，外來物是治療性蛋白、肽、載體、生物化學(xué)載體、脂質(zhì)、碳水化合物、核酸、精子、卵母細(xì)胞或胚胎。在一些實(shí)施方案中，載體為病毒載體、細(xì)菌載體或真菌載體。在一些實(shí)施方案中，病毒載體為dna或rna載體。